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          DNA建庫方法大致可分為這幾種類(lèi)型

          更新時(shí)間:2022-02-21      點(diǎn)擊次數:2344
             DNA分子的功能是貯存決定物種性狀的幾乎所有蛋白質(zhì)和RNA分子的全部遺傳信息,對DNA信息的解讀,對于我們研究生命的奧秘、疾病的機理等有著(zhù)重要的意義。DNA類(lèi)的文庫主要分為:DNA小片段文庫、DNA大片段文庫、Exon文庫、PCR-Free文庫和單細胞文庫等。DNA建庫方法是分子生物學(xué)的實(shí)驗原理,其本質(zhì)就是在待測片段兩端加上接頭的過(guò)程。

            DNA小片段文庫是指片段大小在1kb以下的普通DNA文庫(200bp、350bp、500bp等),DNA小片段文庫可用來(lái)進(jìn)行人重測序,動(dòng)植物、微生物的de novo和重測序,16s rRNA測序,宏基因組測序等項目類(lèi)型的文庫構建。
            DNA大片段文庫,又稱(chēng)之為末端配對(mate-paired)文庫,片段長(cháng)度大于1kb,主要用于動(dòng)植物,微生物的de novo測序。
            PCR-Free文庫,顧名思義,就是在文庫構建過(guò)程中不需要進(jìn)行PCR的文庫。主要是針對一些特殊樣本,比如GC含量高、PCR擴增困難的樣本和PCR產(chǎn)物。不足之處在于所需的樣本起始量較少。
            Exon文庫:人類(lèi)外顯子組總共約30 Mb,占人類(lèi)基因組約1%,外顯子具有高度的保守型,且大部分疾病的致病位點(diǎn)位于外顯子區。外顯子測序是指利用序列捕獲技術(shù)將外顯子區域DNA捕捉并富集后進(jìn)行高通量測序的基因組分析方法。Exon文庫主要用于人全外顯子測序和目標區域測序。
            單細胞DNA文庫:隨著(zhù)二代測序技術(shù)的發(fā)展,把一次實(shí)驗測許多條DNA序列的這個(gè)難題解決之后,一次把一個(gè)人的全基因組給測出來(lái),最極限的情況,就是樣本量少到一個(gè)細胞,就可以測出整個(gè)基因組的序列信息。
           
            目前DNA建庫方法按照接頭連接方式不同可分為五類(lèi):
            1、PCR擴增子建庫;
            2、Swift法建庫;
            3、轉座酶法建庫;
            4、TA克隆連接接頭建庫;
            5、平末端連接接頭建庫。

          DNA建庫

           

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